设计测序引物需要考虑以下几个关键因素：

1. 目标序列的特异性：确保引物与目标DNA序列完全互补，避免非特异性扩增。

2. 引物的长度和Tm值：理想情况下，引物长度应为15-30个碱基对（bp），Tm值（熔解温度）应高于PCR反应的温度，以确保引物在反应中稳定结合。

3. GC含量：引物中的GC含量通常在40%-60%之间，以保持引物的稳定性和特异性。

4. 引物之间的配对：如果使用两个引物进行PCR，确保它们的Tm值相近，以避免错配和非特异性扩增。

5. 避免二级结构：确保引物不会形成二级结构，如发夹结构或DNA双链，这可能会影响引物的结合和扩增效率。在设计引物时，可以使用在线工具，如Primer-BLAST或OligoAnalyzer，来评估引物的质量并优化其参数。