引物设计有 3 条基本原则：

引物与模板的序列要紧密互补。

引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。

再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应(即错配)。

KASP是一种高效、灵敏的分子标记技术，用于研究遗传多样性、基因型和表型相关性等领域。在KASP引物设计上，要考虑以下原则：保证引物序列特异性、避免SNP位点在引物交汇处、引物长度和温度的合理选择、避免引物间的交叉反应。同时，为了准确性和可重现性，还需进行引物优化和验证。综上所述，KASP引物的设计与优化是决定分子标记技术成功率和可靠性的关键。