QPCR引物的GC含量应控制在**40%~60%**之间，过高或过低都不利于引发反应。

其中，G+C含量在45-55％为最佳。此外，引物长度一般在17-25碱基之间，上下游引物不能相差太大。引物二聚体和自二聚体应尽量避免，发卡结构如果不可避免，使ΔG<

4.5kJ/mol。

3′端不可修饰，而且要避开AT、GC rich的区域，避开T/C、A/G连续结构（2-3个）。以上内容仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。