. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。

2. 引物长度一般在15~30碱基之间。

3. 引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。

4. 引物3′端要避开密码子的第3位。

5. 引物3′端不能选择A，最好选择T。

6. 碱基要随机分布。

7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。8. 引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。9. 引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。11. 引物应具有特异性。