酸和醇都有羟基，因此酯化反应脱水机理确实是一个重要问题。

化学中我们采用同位素示踪原子进行分析。即将酸中羟基的氧原子定为O-18原子，酯化反应后用仪器测定O-18的位置，发现它在水中，由此得出结论，酯化反应酸脱羟基醇脱氢。当然也可以定位醇中的氧，这样O-18就在酯中。