革兰染色法【步骤】：制片、染色、镜检1、制片涂片：取洁净载玻片一张，用接种环取生理盐水2环，置于玻片上，接种环灭菌后，取细菌培养物少许与盐水混匀，并涂成均匀薄膜涂片。

如用液体材料，如痰、尿液、脓汁等可直接涂片，不必加生理盐水。干燥：涂片最好在室温下自然干燥，必要时可将标本面向上，小心间断地在弱火高处烘干，但切勿紧靠火焰将涂膜烤枯。固定：涂片干燥后，将标本片在酒精灯上快速的来回通过三次，共约2s～3s，注意温度不可太高，以涂片涂膜的反面触及皮肤觉轻微烫觉即可。固定目的：

①杀死细菌；②使菌体与玻片粘附较牢，在染色时不致被染液和水冲掉；③菌体蛋白变性易着色。

2、染色结晶紫初染1min→卢戈氏碘液媒染1min→95％酒精脱色30sec～1min→稀释石炭酸复红复染1min，油镜观察【原理】：

①革兰阳性细菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易渗入；革兰阴性菌细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易渗入。

②革兰阳性菌的等电点低，革兰阴性菌的等电点较高，在相同ph条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固不易脱色。

③革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，不易被乙醇脱色；而革兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形成的复合物分子也较小，故易被乙醇脱色。【结果观察】：紫色为阳性，红色为阴性【影响因素】①操作因素：涂片太薄或太厚，固定时菌体过分受热，以及脱色时间长短，都会影响染色结果②染液因素：所有染液应防止染液蒸发而改变浓度，特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失去媒染作用；涂片积水过多会改变染液浓度，影响染色效果【意义】：

①鉴定细菌：可将细菌分为革兰阳性菌（紫色）和革兰阴性菌（红色），②观察致病性：大多数g+菌以外毒素为主要致病物质，而g-菌以内毒素为主要致病物质。两者的致病机制和临床表现各不相同，③参考选择抗菌药物：大多数g+菌对青霉素、头孢菌素等敏感；大多数g-菌对氨基苷类抗生素如链霉素、庆大霉素等敏感。【用途】：一般细菌学检查或鉴定我这个比较简单概括，你最好详细化，比如染色步骤